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Bmmp基因通過調(diào)控翅的前-后及近-遠軸的發(fā)育影響翅的形態(tài)發(fā)生

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翅的出現(xiàn)使昆蟲能夠迅速遷移以躲避不利環(huán)境,為昆蟲的生存和繁衍帶來極大的優(yōu)勢。持續(xù)的適應性進化導致昆蟲翅的形態(tài)多種多樣,而翅形態(tài)的差異又對昆蟲的飛行能力具有重要影響。 在翅的發(fā)育過程中,前-后軸和近-遠軸兩個級聯(lián)信號起著至關重要的作用。對于翅的前-后軸的發(fā)育,engrailed基因的表達使翅的后部區(qū)室有別于前部區(qū)室,Engrailed轉(zhuǎn)錄因子僅在后部區(qū)室表達,并激活hedgehog的表達,Hedgehog蛋白的擴散在翅成蟲盤前部區(qū)域一個窄的細胞帶中激活DppWnt1的表達。在翅的近-遠軸的發(fā)育過程中,apterous基因在翅的背部區(qū)室表達,并激活Notch信號通路,轉(zhuǎn)而激活Wnt1在背-腹邊界的表達,Wnt1通過激活distal-less基因幫助建立翅的近-遠軸,distal-less基因特化翅的最遠端區(qū)域。目前,針對單獨調(diào)控翅前-后或近-遠軸發(fā)育的關鍵基因已經(jīng)研究得比較清楚,然而前-后及近-遠軸是如何受到協(xié)同調(diào)控的卻鮮有研究。

基地科研團隊保存有一種小翅突變體(micropterous, mp)。與野生型對照相比,mp突變體蛹的翅不能覆蓋到第三腹節(jié),處于裸露狀態(tài);羽化以后,蛾的翅長顯著短一些,翅的長寬比顯著變小,而翅面積卻未發(fā)生明顯改變。

在該研究中,首先通過配制雜交分離群體,利用定位克隆手段確定了一段約260 kb的基因組區(qū)域與mp小翅表型緊密相關,其中存在2個基因(KWMTBOMO06923、KWMTBOMO06924)。通過對這兩個基因的編碼區(qū)及非編碼區(qū)中存在的mp特異突變進行分析,并結(jié)合基因的表達部位及在翅原基中的表達差異,最終確定KWMTBOMO06924mp突變體的負責基因,并將其命名為Bmmp。接著,利用CRISPR/Cas9技術,獲得了Bmmp基因敲除的純合體。與野生型相比,敲除Bmmp純合體蠶蛾的翅面積顯著減小,且翅的長寬比顯著變小。在Bmmp敲除蠶的翅原基中,調(diào)控前-后軸的基因(engrailed, hedgehog, dpp, gbb)及調(diào)控近-遠軸的基因(apterous A, apterous B, vestigial, wnt1, distal-less)的表達均顯著下調(diào),由此表明,Bmmp基因通過同時調(diào)控前-后軸及近-遠軸的關鍵基因的表達,而影響翅形態(tài)的發(fā)生。調(diào)查mp在果蠅中的直系同源基因的功能,發(fā)現(xiàn)果蠅的mp直系同源基因突變體的翅面積顯著變小,且翅出現(xiàn)卷曲的形態(tài),并導致其飛行能力完全喪失,表明mp基因在家蠶及果蠅中功能具有保守性。