重磅！國內(nèi)著名醫(yī)療機構證實創(chuàng)新中成藥有效抑制乳腺癌干細胞！

乳腺癌成為全球女性最為常見的惡性腫瘤之一，目前手術、放療、化療、內(nèi)分泌治療和分子靶向治療等多種治療方法在一定程度能夠延長生存期，但仍有一部分患者因復發(fā)轉(zhuǎn)移離世。因此，尋找新的治療途徑和藥物仍然重要。

乳腺癌的發(fā)生往往是一個漸進的過程，通常始于乳腺上皮細胞的異常增生和乳腺導管增生，而非典型增生更是被視為乳腺癌的癌前病變。乳腺癌干細胞（CSCs）是腫瘤細胞的一個亞組，它們具有自我更新的能力，多能性和高致瘤性。CSCs可以通過募集各種免疫細胞并與之相互作用來逃避免疫破壞，促進免疫抑制性腫瘤微環(huán)境的建立。腫瘤免疫微環(huán)境由多種免疫細胞組成，包括腫瘤相關巨噬細胞（TAMs）、自然殺傷細胞、骨髓源性抑制細胞(MDSC)、調(diào)節(jié)性T細胞（Tregs）、細胞毒性T淋巴細胞（CTLs）和輔助性T細胞(Th)。巨噬細胞是包括乳腺癌在內(nèi)的多種惡性腫瘤中最豐富的免疫細胞。M2型巨噬細胞在人類腫瘤中占主導地位，并產(chǎn)生促生長趨化因子，促進腫瘤生長。TAMs的浸潤創(chuàng)造了一種支持癌癥發(fā)生和分泌多種細胞因子，促進癌癥血管生成和侵襲，并抑制抗腫瘤免疫的炎癥狀態(tài)。TAMs也與促進乳腺癌的生長和轉(zhuǎn)移有關。

金蓉顆粒（消癖顆粒）獲得了國家藥品監(jiān)督管理局的批準，正式成為治療乳腺增生癥的新選擇。其實金蓉顆粒已經(jīng)作為院內(nèi)制劑在臨床上運用了數(shù)十年，經(jīng)過大約450多萬患者的驗證，因獨特的治療優(yōu)勢獲得廣泛的認可和榮譽，包括國家科技重大專項和國家科學技術二等獎等。

一篇名為“XIAOPI Formula Inhibits Breast Cancer Stem Cells via Suppressing TumorAssociated Macrophages/C-X-C Motif Chemokine Ligand 1 Pathway” 的研究論文驗證了金蓉顆粒抑制乳腺癌干細胞的作用。

圖1 論文首頁

一、金蓉顆粒在共培養(yǎng)體系中顯著抑制乳腺癌細胞增殖和集落形成能力

在腫瘤微環(huán)境中，癌細胞與多種細胞共存，TAMs占比最高，且多呈免疫抑制的M2樣表型，會促進腫瘤生長并增強其耐藥性。

研究采用了MTT法檢測金蓉顆粒對乳腺上皮細胞和乳腺癌細胞的生長抑制作用。結(jié)果顯示金蓉顆粒處理24h或48h后只能適度抑制人乳腺癌細胞MDA-MB-231和小鼠乳腺癌細胞4T1的增殖。然而在2周培養(yǎng)期間金蓉顆?？娠@著抑制乳腺癌細胞MDA-MB-231和4T1的集落形成能力（圖2B），同時對正常乳腺細胞MCF-10A無顯著抑制作用，表明金蓉顆粒對乳腺癌細胞增殖有長期抑制作用。在有TAMs存在的Transwell共培養(yǎng)系統(tǒng)下，金蓉顆粒處理48h后亦能夠顯著抑制共培養(yǎng)體系中MDA-MB-231和4T1這兩種乳腺癌細胞的集落形成能力。

所以金蓉顆粒可顯著抑制乳腺癌細胞增殖與集落形成，尤其是與TAMs共培養(yǎng)時。

圖2 金蓉顆粒顯著抑制乳腺癌細胞增殖和集落形成能力

二、金蓉顆粒抑制乳腺癌細胞和TAMs共培養(yǎng)系統(tǒng)中乳腺CSCs的自我更新活性

乳腺CSCs是乳腺癌細胞增殖和生長啟動細胞，研究發(fā)現(xiàn)金蓉顆粒能顯著降低MDA-MB-231和4T1細胞中ALDH+亞群比例（圖3A），降低乳腺癌細胞和TAMs共培養(yǎng)體系中乳腺微球數(shù)量（圖3B）。研究中采用QPCR方法檢測金蓉顆粒對乳腺癌細胞共培養(yǎng)體系中干細胞相關基因表達水平的影響（圖3C），結(jié)果顯示金蓉顆粒可以顯著減弱包括β-catenin、OCT4和Nanog等干細胞相關基因的表達水平。蛋白質(zhì)印跡法分析進一步證實金蓉顆粒能顯著降低降低β-連環(huán)蛋白表達水平（圖3D），表明金蓉顆?？梢种乒才囵B(yǎng)系統(tǒng)中乳腺CSCs自我更新活性。

圖3 金蓉顆粒抑制乳腺癌細胞和TAMs共培養(yǎng)系統(tǒng)中乳腺CSCs的自我更新活性

三、金蓉顆粒抑制M2表型極化、CXCL1表達和TAMs的分泌

大量研究顯示，腫瘤微環(huán)境中TAMs可以促進腫瘤的生長，通常表現(xiàn)出促腫瘤生長的M2表型，并增強對治療的耐藥性。研究結(jié)果顯示金蓉顆粒能顯著抑制乳腺癌細胞條件培養(yǎng)基誘導TAMs的 M2表型極化（圖4B）。酶聯(lián)免疫吸附試驗表明，金蓉顆粒能顯著抑制TAMs分泌CXCL1，呈劑量依賴性（圖4C）。蛋白質(zhì)印跡法和實時熒光定量（QPCR）結(jié)果進一步證實，金蓉顆粒能顯著抑制人和小鼠TAMs中CXCL1蛋白表達水平(圖4D，E)和mRNA轉(zhuǎn)錄(圖4F)，且呈劑量依賴性。研究通過雙熒光素酶報告基因?qū)嶒灡砻鳎鹑仡w粒能抑制腫瘤細胞CXCL1基因的啟動子活性。

金蓉顆粒可抑制TAMs的分泌及M2表型極化，可以抑制CXCL1的表達，阻斷其在乳腺癌發(fā)展中的促進作用，從而改善腫瘤微環(huán)境。

圖4 金蓉顆粒抑制M2表型極化、CXCL1表達和TAMs的分泌

四、金蓉顆粒通過調(diào)控TAMs/CXCL1通路抑制乳腺CSCs

金蓉顆粒能抑制乳腺癌細胞CXCL1表達，進一步的機制研究證實，TAMs/CXCL1是金蓉顆粒在共培養(yǎng)體系中抑制乳腺癌癥干細胞（CSCs）自我更新的關鍵靶點。研究發(fā)現(xiàn)，CXCL1能促進乳腺癌細胞中的ALDH+亞群和乳腺微球數(shù)量，增強干細胞相關基因表達，并抵消金蓉顆粒對乳腺癌CSCs和乳腺微球形成的抑制作用，這明確了消癖顆粒發(fā)揮作用的關鍵分子靶點，為深入理解其作用機制提供了重要依據(jù)。因此，金蓉顆粒能夠通過抑制TAMs/CXCL通路來抑制乳腺癌細胞和TAMs共培養(yǎng)系統(tǒng)中CSCs的自我更新活性

圖5 金蓉顆粒通過調(diào)控TAMs/CXCL1通路抑制乳腺CSCs

五、金蓉顆粒在體內(nèi)抑制乳腺腫瘤生長及乳腺CSCs活性

在小鼠4T1-Luc異種移植體內(nèi)實驗中，金蓉顆粒具有抗乳腺癌活性，能抑制乳腺腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移（圖6A），同時沒有觀察到治療相關的死亡率或體重明顯下降(圖6C)，這意味著金蓉顆粒給藥不會引起額外的毒性和副作用。

另外體外研究結(jié)果一致，金蓉顆粒還能顯著降低4T1-Luc異種移植物體內(nèi)巨噬細胞的浸潤程度和M2表型極化，能抑制乳腺組織中CXCL1的表達（圖6D、E）。此外金蓉顆粒能顯著降低4T1-Luc異種移植物中ALDH+亞群的比例，抑制ALDH1A1的表達，表明金蓉顆粒能抑制體內(nèi)乳腺CSCs的活性（圖6F、G），進一步證實了金蓉顆粒在體內(nèi)通過調(diào)節(jié)TAMs/CXCL1通路實現(xiàn)這些效果，而且實驗過程中，沒有檢測到金蓉顆粒對小鼠產(chǎn)生任何明顯的副作用，這為其在臨床應用中的安全性提供了有力支持。

圖6 金蓉顆粒在體內(nèi)抑制乳腺腫瘤生長及乳腺CSCs活性

金蓉顆粒能通過阻斷CXCL1介導的TAMs與CSCs之間的相互作用而抑制乳腺癌的生長。本研究不僅揭示了金蓉顆粒在乳腺癌治療中的免疫調(diào)節(jié)機制，而且為TAMs/CXCL1作為乳腺CSCs消除的潛在分子靶點提供了新的見解。

（本文內(nèi)容源自公開發(fā)表的科學研究，用藥請遵醫(yī)囑）

參考文獻：Wang S, Liu X, Huang R, et al. XIAOPI Formula Inhibits Breast Cancer Stem Cells via Suppressing Tumor-Associated Macrophages/C-X-C Motif Chemokine Ligand 1 Pathway. Front Pharmacol. 2019;10:1371. Published 2019 Nov 15. doi:10.3389/fphar.2019.01371

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