最近看到有網(wǎng)友在問：生命科學(xué)是一門實(shí)驗(yàn)科學(xué)，那對于研究生命科學(xué)的人來說，有哪些研究策略和關(guān)鍵技術(shù)需要掌握，才能更好地進(jìn)行科研呢？

其實(shí)，想做好生命科學(xué)研究，最好的做法永遠(yuǎn)都是follow高手。比如實(shí)驗(yàn)室同門，比如閱讀相關(guān)領(lǐng)域文章，特別推薦cell 的文章，其完整和詳盡程度，基本上都是可以進(jìn)入教科書的經(jīng)典。認(rèn)真看一篇文獻(xiàn)，會讓你受益匪淺。下面來和大家聊聊如何從別人的文章中學(xué)習(xí)經(jīng)驗(yàn)！

01，研究策略

我最近看過一篇?jiǎng)e人的文章，感覺非常有參考意義，特別是那些對科研還沒有概念的人。這是一篇關(guān)于怎么開啟科研之旅的小文，專門寫給剛進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室還沒有頭緒的小伙伴。 就拿腫瘤來說，大家可以把腫瘤換成你關(guān)注的任何一個(gè)內(nèi)容，比如腫瘤功能基因的研究套路（我稍作了修改）

文章導(dǎo)讀：芯片篩到了一個(gè)分子、老板拍腦袋想到了一個(gè)分子、師兄／師姐給我留了一個(gè)分子、文獻(xiàn)中看到了一個(gè)亮點(diǎn)分子、數(shù)據(jù)庫中有個(gè)分子也不錯(cuò)······那么問題來了，接下來該怎么辦呢？

1、可行性分析

首先要看這個(gè)分子是不是具有研究潛力，是不是跟腫瘤的發(fā)生發(fā)展有關(guān)。最簡單的方法，一是查文獻(xiàn)報(bào)道，二是在數(shù)據(jù)庫中查找，看這個(gè)基因是不是在腫瘤中有差異表達(dá)。

２、排他性查詢

首先要看一下這個(gè)分子是不是已經(jīng)被報(bào)道過，如果沒有報(bào)道過，那么恭喜你，你已經(jīng)通過了第一關(guān)。如果已經(jīng)有報(bào)道，要分析，都報(bào)道了什么，找出沒有報(bào)道的點(diǎn)。比如這個(gè)分子被報(bào)道影響乳腺癌增殖，那你可以考慮其他腫瘤的增殖方向或者其他表型如遷移、耐藥等。

3、準(zhǔn)備研究工具

要研究一個(gè)基因的功能，最常用的方法就是改變這個(gè)基因在胞內(nèi)的表達(dá)，看一下細(xì)胞表型是否受到變化，常見是敲減、過表達(dá)、突變，都可以通過構(gòu)建相應(yīng)的載體（也可以購買商業(yè)化的克?。D(zhuǎn)染目標(biāo)細(xì)胞，實(shí)現(xiàn)相應(yīng)的基因編輯。

4、確認(rèn)研究表型

這一步，你需要確定這個(gè)基因?qū)δ[瘤的什么功能有影響。功能表型研究有很多，常見如增殖、轉(zhuǎn)移、耐藥，還有難度高一點(diǎn)的血管形成，能量代謝balabala。以增殖為例：通過轉(zhuǎn)染siRNA或能產(chǎn)生siRNA的載體，用CCK8、MTT等方法檢測細(xì)胞的增殖速度是否發(fā)生了變化。

如果有，恭喜你可以進(jìn)入下一關(guān)；如果沒有，請?jiān)囈幌罗D(zhuǎn)移、耐藥等方向，或者，換一個(gè)分子！

5、增加實(shí)驗(yàn)證據(jù)

單單一個(gè)CCK8或是MTT實(shí)驗(yàn)，不足以說明這個(gè)基因?qū)δ[瘤增殖的影響，還需要補(bǔ)充一些實(shí)驗(yàn)，常見的是細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡，通常還要檢測一些增殖相關(guān)的標(biāo)記分子，如Ki67、p-Akt、PCNA。通常需要做2個(gè)以上細(xì)胞株。

到這里，如果獲得的數(shù)據(jù)都是有效的，要發(fā)個(gè)1分的小SCI基本不成問題了。加上臨床樣本的檢測，2分也不是難事。當(dāng)然我相信大家的追求不會止于此，咱們都是追求CNS級別的人（至少幻想過CNS級別的）！那就繼續(xù)！

6、體內(nèi)模型

體內(nèi)體外是完全不同的兩個(gè)環(huán)境，要追求質(zhì)量，動(dòng)物模型的實(shí)驗(yàn)是必須的。腫瘤研究最常用是裸鼠、小鼠模型，偉大的研究者們運(yùn)用強(qiáng)大的基因編輯技術(shù)，在這些普通的模型上建立了具有特定表型的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物模型（如MMTV-PyMT轉(zhuǎn)基因小鼠，可自發(fā)性產(chǎn)生乳腺癌；腫瘤中常用的動(dòng)物模型）。

7、分子作用機(jī)制研究

首先要找到與表型掛鉤的下游分子，比如增殖相關(guān)Akt、p53、MAPK等信號通路。

怎么找？

保（窮）守（逼）一點(diǎn)，就是經(jīng)典的幾個(gè)通路，一個(gè)一個(gè)試；奔（土）放（豪）一點(diǎn)的，直接上基因/蛋白芯片進(jìn)行通路篩選。

接著要找到這個(gè)分子對這個(gè)信號通路調(diào)節(jié)的方式，如直接調(diào)控的分子（酵母雙雜、免疫沉淀可以篩選有蛋白相互結(jié)合作用的分子，ChIP、RIP可以篩選與蛋白相互結(jié)合的DNA、RNA）。

8、臨床意義

最后，在大量臨床樣本中驗(yàn)證目標(biāo)分子的表達(dá)（這個(gè)，也可以在第一步就做了。再PS一下，樣本量越大越有意義，差異約顯著價(jià)值越高）。還要（最好）檢測一下目標(biāo)分子調(diào)節(jié)的下游分子在臨床組織中是不是也受到了目標(biāo)分子的調(diào)控。都做到最后這一步了，成功指日可待！你還怕辛苦么？！

別看6、7、8點(diǎn)說起來輕松，做起來可是燒錢更燒腦的事情。

02，關(guān)鍵技術(shù)

大家可以看一本《分子克隆》，這本書是生命科學(xué)試驗(yàn)技術(shù)的圣經(jīng)，非常具有參考性，當(dāng)然，冷泉港的內(nèi)容也是非常精彩的（特別是蛋白方面）。作為一個(gè)目前最火爆的學(xué)科，技術(shù)進(jìn)步對生命科學(xué)的推動(dòng)十分大。

1、 從對生命科學(xué)發(fā)展影響來看，影響最大的技術(shù)依次如下：

PCR技術(shù)：真正的讓生物成為瓶子里的實(shí)驗(yàn)

Sanger測序技術(shù)：完成了人類基因圖譜的構(gòu)建

細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)：體外模擬生命過程

二代測序技術(shù)：對生命科學(xué)爆發(fā)起到了引爆和促進(jìn)的作用

基因編輯技術(shù)：未來生命科學(xué)的大方向，人類掌握了上帝的技術(shù)（zfn，talen crispr）

2、從在研究中最常見最基本的角度來看，包括以下常見技術(shù)

核酸提?。喊―NA和RNA的提取及反轉(zhuǎn)錄等

PCR

質(zhì)粒構(gòu)建：轉(zhuǎn)基因載體，過表達(dá)載體等

DNA電泳

干擾敲除：細(xì)胞水平上研究基因功能

核酸雜交：包括Souther/northern blot

蛋白電泳/western blot

細(xì)胞培養(yǎng)

切片及免疫實(shí)驗(yàn)